組織總磷含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
組織總磷含量測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
磷的存在形態(tài)包括無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷。無(wú)機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過(guò)測(cè)定總磷與無(wú)機(jī)磷含量即可了解作物對(duì)磷的利用率，進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。
測(cè)定原理：
總磷經(jīng)消化后，轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的經(jīng)典方法，一定條件下，鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定660nm光吸收，即可計(jì)算無(wú)機(jī)磷含 量，進(jìn)而可計(jì)算出組織中總磷含量。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存（強(qiáng)腐蝕性，強(qiáng)氧化性）。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入15 mL蒸餾水，溶解后再加入10 mL試劑二，混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，－20℃保存。
有機(jī)磷消化：
取帶蓋試管，進(jìn)入精確稱(chēng)取50℃烘干至恒重的約0.1 g組織，加濃硫酸1.0 mL，蓋緊（防止水分散失）后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色時(shí)取出。稍冷后，加試劑一200μL，充分混勻，蓋緊后繼續(xù)沸水浴，直到溶液呈透明狀，取出室溫冷卻后，加蒸餾水8.8 mL，充分混勻；室溫，8000g，離心10min，取上清液待測(cè)。
組織總磷含量測(cè)定試劑盒測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管：取EP管，依次加入500μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，450μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測(cè)定管：取EP管，依次加入50μL上清液，450μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
組織總磷含量計(jì)算公式：
（1） 按照蛋白含量計(jì)算
總磷含量(mmol/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷Cpr
= 1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W
（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
總磷含量(mmol/g 干重)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W
= 1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；V總：上清液總體積，10 mL=0.01 L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑三需臨用前配制，并且當(dāng)天使用完畢。
2. 40min內(nèi)完成比色。
3. 最低檢出限為10μmol/L。
關(guān)鍵字： 組織總磷含量測(cè)定試劑盒;組織總磷含量測(cè)定試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶(hù)厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以?xún)?yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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