【鯉春病毒血癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒利用PCR原理，定性檢測(cè)病毒，對(duì)病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。
【檢驗(yàn)原理】
利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取RNA，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點(diǎn)合成與RNA模板互補(bǔ)的cDNA鏈。在TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過(guò)35次循環(huán)，最終使擴(kuò)增DNA片段放大了數(shù)百萬(wàn)倍。將擴(kuò)增DNA片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后，在紫外燈照射下，肉眼可見到DNA片段的擴(kuò)增帶。
【主要組成成份】
組成 | 50T/盒 |
PPRV RT-PCR反應(yīng)液 | 750 μL×1管 |
PPRV 混合酶液 | 150 μL×1管 |
PPRV 陽(yáng)性對(duì)照 | 40 μL×1管 |
PPRV 陰性對(duì)照 | 40 μL×1管 |
說(shuō)明書 | 1份 |
注：陰性對(duì)照為基因組DNA，陽(yáng)性對(duì)照為失去活性的貓冠狀病毒cDNA。
【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【需自備的物品】PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀、可調(diào)移液器、瓊脂糖等相關(guān)試劑及設(shè)備。
【注意事項(xiàng)】
1.病毒具有很強(qiáng)的感染能力，操作前必須準(zhǔn)備好各種防御措施。
2.操作時(shí)須嚴(yán)格按照步驟進(jìn)行，廢物必須放入含消毒液的廢物缸，以免污染實(shí)驗(yàn)室和工作人員。
3.為避免其他核酸的污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性，必須使用不含DNA和RNA的離心管、吸管、槍頭、試劑和手套，操作人員須戴口罩。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
如果是提取病毒RNA，請(qǐng)選用RNase free Tip槍頭和1.5 ml離心管或?qū)岊^和離心管用0.1% DEPC水處理后再使用。
【鯉春病毒血癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒操作步驟】
1.樣品處理
(1). 適用標(biāo)本類型：發(fā)病動(dòng)物血液、空腸及小腸腸內(nèi)容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結(jié)等)和病毒培養(yǎng)液。
(2). 標(biāo)本采集，方法如下：
a.血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉(zhuǎn)至5ml 的干燥管中，密閉送檢。
b.腸內(nèi)容物：無(wú)菌條件下取腸道內(nèi)容物約1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的5ml 離心管中，立即送檢。
c.組織臟器：取發(fā)病動(dòng)物腸道組織及腸系膜淋巴結(jié)等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。
(3).應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。
(4).標(biāo)本收集后可立即檢測(cè)；若不能立即檢測(cè)，可置于2～8℃冷藏過(guò)夜保存；如需長(zhǎng)期保存，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下，避免反復(fù)凍融。
2. 提取過(guò)程
用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書操作。
3. RT-PCR擴(kuò)增
（1）每份總體積20 μL，含15 μL RT-PCR反應(yīng)液（用前混勻），3μL 混合酶液，2 μL模板RNA。
例如：n份樣品，配制n+1份，15×（n+1）RT-PCR反應(yīng)液， 3×（n+1）混合酶液勻后取18 μL分裝成n份，分別加入2 μL模板RNA，作好標(biāo)記。
（2）在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行以下程序：50 ℃ 10 min，94 ℃ 3 min；循環(huán)94℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35次；再72 ℃延伸7 min。
4. 電泳
稱1.5 g瓊脂糖放于500 mL錐形瓶中，加入1倍TAE電泳緩沖液100 mL（取2 mL 50倍TAE電泳緩沖液，用雙蒸水稀釋至100 mL），于微波爐中熔解，待冷卻至50℃左右再加入50 μL染色液（自備）混勻。在電泳槽內(nèi)放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入4μL上樣緩沖液（自備）混勻后取10 μL點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110～120V電壓于1倍TAE電泳緩沖液中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果。（注：染色液是2000×，上樣緩沖液是6×）
【結(jié)果判定】
陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)191 bp擴(kuò)增帶、陰性對(duì)照無(wú)帶出現(xiàn)（引物帶除外）時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)191 bp擴(kuò)增帶為貓冠狀病毒陽(yáng)性，否則為陰性。
鯉春病毒血癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒關(guān)聯(lián)產(chǎn)品
Choanotaenia infundibulum漏斗狀帶絳蟲PCR試劑盒13-3110050次2990元
Choanotaenia infundibulum漏斗狀帶絳蟲染料法熒光定量PCR試劑盒14-3110050次2990元
Choanotaenia infundibulum漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒15-3110050次3990元
CHO中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞基因組DNA殘留探針法熒光定量PCR試劑盒(不含內(nèi)參)15-17050T3990元
Chrysanthemum Virus B(CVB)菊花病毒B型PCR試劑盒13-175050次2990元
Chryseobacterium meningsepticum腦膜炎敗血金黃桿菌LAMP試劑盒16-2260050次3490元
Chryseobacterium meningsepticum腦膜炎敗血金黃桿菌PCR試劑盒13-2260050次2990元
Chryseobacterium meningsepticum腦膜炎敗血金黃桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒14-2260050次2990元
Chryseobacterium meningsepticum腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒15-2260050次3990元
Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅LAMP試劑盒16-5220050次3490元
Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅PCR試劑盒13-5220050次2990元
Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅染料法熒光定量PCR試劑盒14-5220050次2990元
Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒15-5220050次3990元
Chrysomyxa arctostaphyli云杉帚銹病菌PCR試劑盒13-176050次2990元
Chuzan Virus中山病毒RT-LAMP試劑盒16-3730050次3990元
Chuzan Virus中山病毒RT-PCR試劑盒13-3730050次3490元
Chuzan Virus中山病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒14-3730050次3490元點(diǎn)擊下載 14-37300 中山病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒使用手冊(cè)V1.0
Chuzan Virus中山病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒15-3730050次4490元
Ciborinia camelliae Kohn山茶花腐病菌PCR試劑盒13-177050次2990元
Citrobacter freundii弗氏檸檬酸桿菌LAMP試劑盒16-3780050次3490元
Citrobacter freundii弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒13-3780050次2990元
Citrobacter freundii弗氏檸檬酸桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒14-3780050次2990元
Citrobacter freundii弗氏檸檬酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒15-3780050次3990元
Citrobacter spp. 檸檬酸桿菌屬通用LAMP試劑盒16-3781050次3490元
Citrobacter spp. 檸檬酸桿菌屬通用PCR試劑盒13-37810y50次2990元點(diǎn)擊下載 13-37810 檸檬酸桿菌屬通用PCR試劑盒
Citrobacter spp. 檸檬酸桿菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒14-3781050次2990元
Citrobacter spp. 檸檬酸桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒15-3781050次3990元
Citrus Tristeza Virus(CTV)柑橘衰退病毒RT-PCR試劑盒13-178050次3490元點(diǎn)擊下載 13-1780 柑橘衰退病毒RT-PCR試劑盒使用手冊(cè)1.0
Cladosporium carrionii卡氏枝孢霉LAMP試劑盒16-1691050次3490元
Cladosporium carrionii卡氏枝孢霉PCR試劑盒13-1691050次2990元
Cladosporium carrionii卡氏枝孢霉染料法熒光定量PCR試劑盒14-1691050次2990元
Cladosporium carrionii卡氏枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒15-1691050次3990元
Cladosporium cucumerinum黃瓜黑星病菌PCR試劑盒13-179050次2990元
Cladosporium spp.枝孢霉通用LAMP試劑盒16-1690050次3490元
Cladosporium spp.枝孢霉通用PCR試劑盒13-1690050次2990元
Cladosporium spp.枝孢霉通用染料法熒光定量PCR試劑盒14-1690050次2990元
Cladosporium spp.枝孢霉通用探針法熒光定量PCR試劑盒15-1690050次3990元
Cladosporium trichoides毛樣枝孢霉LAMP試劑盒16-1692050次3490元
Cladosporium trichoides毛樣枝孢霉PCR試劑盒13-1692050次2990元
Cladosporium trichoides毛樣枝孢霉染料法熒光定量PCR試劑盒14-1692050次2990元
Cladosporium trichoides毛樣枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒15-1692050次3990元
Clark 改良 Bodian 法神經(jīng)組織染色試劑盒160374100次1990元點(diǎn)擊下載 160374 Clark 改良 Bodian 法神經(jīng)組織染色試劑盒使用手冊(cè)V1.0
Clark改良Van Gicson臺(tái)盼藍(lán)法膠原纖維染色試劑盒160321100次1990元點(diǎn)擊下載 160321 Clark改良Van Gicson臺(tái)盼藍(lán)法膠原纖維染色試劑盒使用手冊(cè)1.0
Classical Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(C-PRRSV)豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型經(jīng)典株RT-LAMP試劑盒16-2905050次3990元
Classical Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(C-PRRSV)豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型經(jīng)典株RT-PCR試劑盒13-2905050次3490元
Classical Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(C-PRRSV)豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型經(jīng)典株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒14-2905050次3490元
Classical Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(C-PRRSV)豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型經(jīng)典株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒15-2905050次4490元
Classical Swine Fever Virus(CSFV)豬瘟病毒RT-LAMP試劑盒16-42300y50次3990元
Classical Swine Fever Virus(CSFV)豬瘟病毒RT-PCR試劑盒13-42300y50次3490元點(diǎn)擊下載 13-42300豬瘟病毒RT-PCR試劑盒使用手冊(cè)1.0
Classical Swine Fever Virus(CSFV)豬瘟病毒染料
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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