產(chǎn)品名稱(chēng)：B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001） |
細(xì)胞描述 | 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng) |
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：無(wú)血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請(qǐng)參考我司官網(wǎng)貨號(hào)：C7001）
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞部分相關(guān)細(xì)胞如下：
人膽囊上皮細(xì)胞永生化
人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化
人胰腺癌細(xì)胞永生化
人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP
C57小鼠巨噬細(xì)胞永生化
人乳腺腺癌細(xì)胞+luc
豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化
人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞永生化
人腸癌細(xì)胞永生化
豬脂肪干細(xì)胞永生化
鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化
羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞永生化
兔肝間質(zhì)細(xì)胞永生化
人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化
人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化
山羊乳腺上皮細(xì)胞永生化
豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化
人乳腺上皮細(xì)胞+RFP
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化
人副神經(jīng)節(jié)瘤細(xì)胞永生化
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP
人腸息肉上皮細(xì)胞永生化
人膽囊癌細(xì)胞+luc
人膽囊癌細(xì)胞+luc
人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株
人原代聽(tīng)神經(jīng)瘤細(xì)胞永生化
人原代髓核細(xì)胞永生化
人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化
人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化
人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化
大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化
小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化
小鼠肝癌細(xì)胞+luc
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞+luc
小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化
鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化
湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化
更多細(xì)胞請(qǐng)咨詢我們：B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞
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