細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)是檢測培養(yǎng)細(xì)胞增殖能力的有效方法之一，通過計(jì)算集落形成率(colony forming efficiency)，來測定測試細(xì)胞的增殖能力。

6孔板、吸管、槍頭、血球計(jì)數(shù)板、基質(zhì)膠等放入超凈工作臺消毒30min。

①取出貼壁率>90%的細(xì)胞（處于對數(shù)生長期），消化離心，重懸細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

②6孔板種板：實(shí)驗(yàn)分組，每個(gè)孔中加入1000個(gè)細(xì)胞，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

③培養(yǎng)1周后，當(dāng)肉眼可見集落形成時(shí)，取出6孔板，棄除培養(yǎng)液，每孔加入2mL甲醇固定30min，棄除甲醇，每孔加入2mL0.1%結(jié)晶紫染色3min，然后清洗掉結(jié)晶紫，數(shù)碼相機(jī)拍照，光鏡下計(jì)數(shù)集落

1．收集對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，用含20%FBS的DMEM制成1000活細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液。 

2．用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個(gè)濃度的低熔點(diǎn)瓊脂糖，高壓滅菌后，維持在40℃不會(huì)凝固； 

3．1.2%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作為底層瓊脂，置CO2溫箱中備用； 

4．0.7%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，再加入細(xì)胞懸液充分混勻，RT凝固作為上層瓊脂，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。  

5．然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。 

6．培養(yǎng)7～l0天，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。 

以肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算：集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔，集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100％