細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來(lái)，所以可以說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。原代細(xì)胞具有高度的靈敏性，是現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)中常用的細(xì)胞之一，原代細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)也是生物技術(shù)中常用的技術(shù)。下面介紹一種常用的酶消化法分離BMSC的方法。
分離方法
BMSC 的分離：取 4 周齡雄性大鼠頸椎脫臼處死，75% 乙醇浸泡 15 min。無(wú)菌條件下分離脛骨、股骨，剪開脛骨、股骨干骺端，再用 1 ml 注射器吸取預(yù)冷磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗骨髓腔，獲得骨髓細(xì)胞懸液，置于含有 10% FBS 和雙抗（青霉素 100U/ml、鏈霉素 100U/L，PH：7.2-7.4）的 DMEM/F-12 中，37 ℃、95%濕度和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后首次半量換液，然后每 3 d 全量換液。BMSC 的傳代：當(dāng)黏附細(xì)胞長(zhǎng)到 80% 融合時(shí)可進(jìn)行細(xì)胞傳代。倒掉培養(yǎng)瓶中的液體，PBS 沖洗 3 次，加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL，輕搖搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，然后培養(yǎng)箱中孵育 5 min。孵育結(jié)束后立即倒掉胰酶，迅速加入 0.5 mL FBS 終止消化，然后加入 5 mL PBS，用移液器輕輕吹打瓶底細(xì)胞，傳代比例為 1：3。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果上圖我司從事CRO一站式技術(shù)服務(wù)、動(dòng)物造模、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、蛋白、代謝組學(xué)、病理實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞課題和動(dòng)物課題、等我們有P2、SPF級(jí)，有活體成像、病理全掃、硬切、流式周期等公司優(yōu)勢(shì)：周期短，價(jià)格優(yōu)惠，質(zhì)量保證。
BMSC 的分離：取 4 周齡雄性大鼠頸椎脫臼處死，75% 乙醇浸泡 15 min。無(wú)菌條件下分離脛骨、股骨，剪開脛骨、股骨干骺端，再用 1 ml 注射器吸取預(yù)冷磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗骨髓腔，獲得骨髓細(xì)胞懸液，置于含有 10% FBS 和雙抗（青霉素 100U/ml、鏈霉素 100U/L，PH：7.2-7.4）的 DMEM/F-12 中，37 ℃、95%濕度和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后首次半量換液，然后每 3 d 全量換液。
BMSC 的傳代：當(dāng)黏附細(xì)胞長(zhǎng)到 80% 融合時(shí)可進(jìn)行細(xì)胞傳代。倒掉培養(yǎng)瓶中的液體，PBS 沖洗 3 次，加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL，輕搖搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，然后培養(yǎng)箱中孵育 5 min。孵育結(jié)束后立即倒掉胰酶，迅速加入 0.5 mL FBS 終止消化，然后加入 5 mL PBS，用移液器輕輕吹打瓶底細(xì)胞，傳代比例為 1：3。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果上圖
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