細(xì)胞核提取試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
細(xì)胞核是細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器，也是遺傳物質(zhì)分布的重要場所，分離細(xì)胞核，可用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的生物學(xué)實驗。本產(chǎn)品利用蔗糖密度梯度離心法，能夠快速且完整的分離細(xì)胞核。
二、運輸與存儲條件。
本產(chǎn)品常溫運輸，4 ℃保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 本產(chǎn)品操作簡單，可以快速分離細(xì)胞核。
2. 本產(chǎn)品分離的細(xì)胞核完整，純度高。
四、自備試劑與耗材。
PBS、RIPA 裂解液（不含 SDS）、1.5 ml 離心管、震蕩混勻儀（Vortex mixer）、冷凍離心機。
五、使用說明。
1. 細(xì)胞處理。胰酶消化法收集貼壁生長細(xì)胞，或離心法直接收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，每個樣品中細(xì)胞數(shù)量為 2×107，加入 1 ml Buffer NA，震蕩（Vortex），重懸細(xì)胞。
2. 細(xì)胞裂解。將細(xì)胞重懸液轉(zhuǎn)入勻漿器，勻漿 50-100 次，至顯微鏡下觀察到 80%以上細(xì)胞都破碎為止。
3. 離心。將細(xì)胞勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5 ml 離心管，600×g，4 ℃離心 10 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 1.5 ml離心管，即為細(xì)胞漿（可保存在-80 ℃），沉淀為粗細(xì)胞核。
4. 粗細(xì)胞核中加入 1 ml Buffer NA 重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清。
5. 細(xì)胞核純化。向細(xì)胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB，震蕩（vortex）重懸，16,000×g，4 ℃離心15-30 min，棄上清。
6. 細(xì)胞核洗滌。向細(xì)胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA，震蕩（vortex）重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清，沉淀即為純化細(xì)胞核。
7. 細(xì)胞核可暫時存放在-80 ℃冰箱中，也可立即裂解，抽提核蛋白。
8. 細(xì)胞核裂解。主要包括以下二種方式。
1) 變性裂解液裂解。利用本公司的細(xì)胞裂解液（Laemmli Buffer，2×）重懸細(xì)胞核沉淀，裂解細(xì)胞核，提取細(xì)胞核蛋白，用于 western blot 分析。但提取蛋白已經(jīng)變性，不可用于酶活性測定。
2) RIPA 裂解液裂解。利用溫和的 RIPA 裂解液（不含 SDS）重懸細(xì)胞核沉淀，裂解細(xì)胞核，提取蛋白，用于酶活性測定及 western blot 等實驗。
六、注意事項
1. 整個操作過程需在低溫條件下進行，所用試劑提前預(yù)冷。
2. 為了減少其它細(xì)胞器污染，提取的細(xì)胞漿溶液可以12,000×g，4 ℃離心15 min，棄沉淀，上清即為純化后的細(xì)胞漿，轉(zhuǎn)移至新的離心管，凍存。
3. 為了抑制蛋白降解，實驗過程中可添加蛋白酶抑制劑（如cocktail等）。
關(guān)鍵字： 細(xì)胞核提取試劑盒;高純細(xì)胞核分離;
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