"HCE-2 [50.B1]:人角膜上皮復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

Vero-E6細胞類似產品：：LS-513細胞、KMH-2細胞、PSN1細胞

LCLC103H細胞類似產品：：CHO-S細胞、OAC-P4C細胞、MDA-MB-134細胞

SUM-52細胞類似產品：：AG 9細胞、B16/F0細胞、HCC 2185細胞

KYSE-270細胞類似產品：：MCA 38細胞、NCI-H2108細胞、GM02132C細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：角膜上皮；Ad１２-SV４０；男性

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細胞形態(tài)：上皮細胞樣

IFRS1細胞類似產品：：SNU-423細胞、GM06141細胞、TE13細胞

HS578細胞類似產品：：CAMA-1細胞、SCCVII/St細胞、MT-3 [Human leukocytes]細胞

HeLa-229細胞類似產品：：HEK 293T/17細胞、HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]細胞、SP2/0 Ag-14細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。研究人員在細胞培養(yǎng)時出現存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C 太久。一些懸浮細胞抱團生長是正?，F象，大部分懸浮細胞在細胞密度很GAO的情況下，很可能會出現部分細胞抱團生長的現象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制HAO細胞密度。如果出現了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細胞團）。部分細胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個是正?，F象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態(tài)；如果大部分細胞出現空泡，且單個細胞內空泡數目偏多，則可能細胞代次較GAO，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

H1694細胞類似產品：：beta TC6細胞、TE671細胞、CCRF/CEM/0細胞

RS(4;11)細胞類似產品：：Stanford University Pediatric T-cell line 1細胞、MUTZ1細胞、THLE2細胞

MSF細胞類似產品：：H2227細胞、U87-MG細胞、Panc 10.05細胞

B78細胞類似產品：：RPMI6666細胞、SW-1783細胞、ASH3細胞

HEK 293 c18細胞類似產品：：HBEpiC細胞、OVCAR 420細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細胞

C4-2細胞類似產品：：BC-024細胞、NCI-H1693細胞、MDAMB453細胞

TF1細胞類似產品：：NB1-RGB細胞、SHEP1細胞、BetaTC6細胞

FO [Mouse myeloma]細胞類似產品：：P31/Fujioka細胞、Colo16細胞、MHH-CALL-2細胞

HIC細胞類似產品：：hA549細胞、GP2d細胞、SF 763細胞

ECV304細胞類似產品：：H82細胞、3T3L1細胞、GOS-3細胞

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SW1353細胞類似產品：：GP293細胞、L5178Y細胞、CAL-51細胞

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BIC-1細胞類似產品：：BALB/c 3T3 clone A31細胞、SW-756細胞、ONS76細胞

NK-92細胞類似產品：：WPMY1細胞、CAL-62細胞、MDA-MB-361細胞

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FCCH1018細胞類似產品：：VP 229細胞、210RCY3-Ag1.2.3細胞、EFM-192C細胞

NE1細胞類似產品：：LS 180細胞、OV-2008細胞、MEC-1細胞

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HT-1197細胞類似產品：：766T細胞、GA-10 (Clone 4)細胞、HCT-8/V細胞

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DK-MG細胞類似產品：：CAL-12T細胞、NRCC細胞、OCI-LY-18細胞

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UACC 812細胞類似產品：：RL-952細胞、VMM5細胞、Tu212細胞

HCE-2 [50.B1]:人角膜上皮復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

SK-ChA-1細胞類似產品：：CHL細胞、PC-3細胞、TOV-112D細胞

PANC 327細胞類似產品：：HepG2/C3A細胞、PC-3M IE8細胞、2E8細胞

CLL-CII細胞類似產品：：SW13細胞、H-441細胞、D341Med細胞

M-14細胞類似產品：：SW626細胞、NIH 3T6細胞、BNL-CL.2細胞

HCe-8693細胞類似產品：：MOLM-16細胞、UACC893細胞、OCIAML5細胞

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