"MES-SA/Dx5:人子宮肉瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞生長:貼壁
凍存和復蘇的原則:慢凍快融》當細胞冷到零度以下,可以產生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質濃度升GAO,并在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內不致產生大的冰晶;相反,結晶就大,大結晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結晶。慢凍程序》1.標準程序:采用細胞凍存器》當溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當溫度達-25℃以下時,5~10℃/min;當溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內,紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法:1.預先配制凍存液》(1)8%DMSO+細胞生長液(92%血清)2.取對數生長期細胞,經胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細胞/ml)。3.加入1ml細胞于凍存管中,密封后標記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復蘇方法:1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑別敏感解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
786-O RCC細胞類似產品::SMA 560細胞、Murine Carcinoma-38細胞、VK2/E6E7細胞
NCIH510細胞類似產品::N-9細胞、HCT GEO細胞、SNU-886細胞
MNNG細胞類似產品::I90細胞、Clone 929細胞、SW 839細胞
LL/2 (LLC1)細胞類似產品::HeLa229細胞、ROS 17/2.8細胞、LAN6細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
MES-SA/Dx5:人子宮肉瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞形態(tài):上皮細胞樣
L-6細胞類似產品::L02細胞、ATN-1細胞、HOS-143B細胞
NCI-H220細胞類似產品::HEC-1A細胞、WM 239細胞、MUTZ1細胞
NCI-ADR-RES細胞類似產品::Wayne State University-Head and Neck 13細胞、RPMI1846細胞、WEHI164細胞
常見培養(yǎng)細胞預防污染的有效措施:體外培養(yǎng)的細胞受到嚴重污染時,有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到Zui小程度。一般預防可從以下幾方面著手:1)添加抗生素:各種抗生素性質不同,對各種微生物的作用也不同,聯(lián)合應用比單用效果HAO,預防性應用比污染后使用HAO(但迄今尚無對抗支原體抗生素)。但反復使用抗生素會使微生物產生耐藥性,且對細胞本身也有一定影響,因此為避免誘導抗藥細菌,應定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素,或盡可能不用抗生素處理;2)從物品、用品消毒滅菌著手:細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時,在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應選擇Zui后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后,使用可移動的紫外燈至少消毒30min,加入GAO壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和酸銅加3L滅菌超純水混合成酸銅溶液加入水槽中。
細胞傳代方法:1:2-1:8傳代;每周2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁生長
貼壁細胞傳代:去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代:一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良HAO,當補液時,需避免反復吹打。
HeLa/DDP細胞類似產品::COLO 320細胞、KATO 3細胞、L-6 myoblast細胞
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NCI-H211細胞類似產品::H22細胞、JG細胞、P3 (Jiyoye)細胞
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上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。