"HEK293-F:人胚腎復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

SKRC-39細胞類似產(chǎn)品：：H1155細胞、SPDC-CCL141細胞、MOLT-3細胞

tdott細胞類似產(chǎn)品：：PANC0813細胞、PC-3M-2B4細胞、U-2932細胞

RFL 6細胞類似產(chǎn)品：：BT 325細胞、HEC1-A細胞、SUM52細胞

P-19細胞類似產(chǎn)品：：HPAF/CD18細胞、184A1細胞、Spodoptera frugiperda clone 9細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

HEK293-F:人胚腎復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

CCC-HEH-2細胞類似產(chǎn)品：：SK-GT-4細胞、Tn5 B1-4細胞、MESSADX5細胞

SKOV-3細胞類似產(chǎn)品：：MOLT 3細胞、MADB-106細胞、G-292細胞

SW 962細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly07細胞、MMAc.SF細胞、SNU-119細胞

細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：傳代培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以１：２或１：２以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞，可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟：①入無菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒雙手；②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液３７℃下預熱；③超凈臺臺面應整潔，用７５%酒精棉球擦拭清潔；④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面２０min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風機清潔空氣除去臭氧；⑤點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；⑥將培養(yǎng)用液瓶口用７５%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每個大培養(yǎng)瓶加入１ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋HAO瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化HAO的細胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋HAO瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO２的進入，將培養(yǎng)瓶放回CO２培養(yǎng)箱；⑩對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟７-９不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。

細胞傳代方法：１：２傳代

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

HEK293-F:人胚腎復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁生長；懸浮生長

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C 太久。一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很GAO的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制HAO細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細胞團）。部分細胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài)；如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較GAO，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

Spodoptera frugiperda clone 9細胞類似產(chǎn)品：：IPLB-Sf21細胞、VP 267細胞、KBM5細胞

Epstein-Barr-1細胞類似產(chǎn)品：：HIT T-15細胞、HCC1359細胞、MDCC-MSB-1細胞

H1792細胞類似產(chǎn)品：：IM9細胞、Caco-2BBe細胞、MRC-V細胞

OCI/AML-4細胞類似產(chǎn)品：：IGR.OV1細胞、PTK 2細胞、COLO 16細胞

N-87細胞類似產(chǎn)品：：108CC15細胞、Hs 895 T細胞、KYSE 520細胞

HCE-2 [50.B1]細胞類似產(chǎn)品：：G-401細胞、HRA-19細胞、NCIH378細胞

Hs 729細胞類似產(chǎn)品：：SK Hep1細胞、YES-2細胞、JB-6 Cl 30細胞

SNK-1細胞類似產(chǎn)品：：CCD 966SK細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-453細胞、H-2085細胞

NCI-747細胞類似產(chǎn)品：：Ramos-2G6-4C10細胞、CHG5細胞、FRO81-2細胞

PK13細胞類似產(chǎn)品：：MIA PaCa-2細胞、MM1S細胞、BEAS-2B細胞

A204細胞類似產(chǎn)品：：HuT 102細胞、KY-270細胞、TK10細胞

MPC5細胞類似產(chǎn)品：：COLO-HSR細胞、CCRF.CEM細胞、H-2052細胞

TOV112細胞類似產(chǎn)品：：SKHEP-1細胞、DU145細胞、Hs683細胞

MSB-1細胞類似產(chǎn)品：：WEHI3細胞、MC57細胞、NBL-5細胞

PE/CA-PJ34細胞類似產(chǎn)品：：HIT-T15細胞、NS20-Y細胞、Hce8693細胞

CATH-a細胞類似產(chǎn)品：：M210B4細胞、HCFB（HCF）細胞、Hs-688A-T細胞

CATH-a細胞類似產(chǎn)品：：M210B4細胞、HCFB（HCF）細胞、Hs-688A-T細胞

Panc_05_04細胞類似產(chǎn)品：：JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞

KP-2細胞類似產(chǎn)品：：NBL-S細胞、Colo-206F細胞、NCI-SNU-16細胞

KTC1細胞類似產(chǎn)品：：VMM39細胞、3T3 Swiss Albino細胞、HCC-94細胞

NKM1細胞類似產(chǎn)品：：ECC 10細胞、RD-2細胞、766T細胞

B/C3T3細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1672細胞、HMC細胞、HNE3細胞

Rat Fetal Lung-6細胞類似產(chǎn)品：：JB6 [Mouse]細胞、HUV-EC-C細胞、SK-MEL-2細胞

HEC1-B細胞類似產(chǎn)品：：HConEpic細胞、HT 1376.T細胞、GDM-1細胞

HEK293-F:人胚腎復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

HEC1-B細胞類似產(chǎn)品：：HConEpic細胞、HT 1376.T細胞、GDM-1細胞

Fetal Rhesus Kidney-4細胞類似產(chǎn)品：：IGR-OV1細胞、HOS TE85細胞、LAN-6細胞

NCI-H1155細胞類似產(chǎn)品：：H-146細胞、MDCK-II細胞、RSMC細胞

Pan02細胞類似產(chǎn)品：：OVCAR.5細胞、JTC-28細胞、EHEB細胞

SVEC4-10細胞類似產(chǎn)品：：Hx147細胞、CORL88細胞、Hs 729.T細胞

DCS細胞類似產(chǎn)品：：GM16136細胞、KMS-26細胞、DU_145細胞

M 1細胞類似產(chǎn)品：：32D.cl3細胞、NCIH187細胞、639 V細胞

H520細胞類似產(chǎn)品：：EoL-1 cell細胞、NCIH660細胞、MLA-144細胞

MV(4;11)細胞類似產(chǎn)品：：PC12(高分化)細胞、WISH細胞、451-LU細胞

NSC-34細胞類似產(chǎn)品：：CMK細胞、FRhK-4細胞、SKRC 39細胞

PC-3M-IE8細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-231-GFP細胞、M059J細胞、CCK-81細胞

H-747細胞類似產(chǎn)品：：HPC-Y5細胞、H727細胞、VMRC-LCD細胞

AN3細胞類似產(chǎn)品：：Kasumi 1細胞、alpha TC1 clone 6細胞、MNNG/HOS Cl #5細胞

SUM 159細胞類似產(chǎn)品：：C8-D1A細胞、IALM細胞、NCI-H2066細胞

H-1836細胞類似產(chǎn)品：：Colo699細胞、BJ [Human fibroblast]細胞、SK-N-AS細胞

NCIH82細胞類似產(chǎn)品：：HT55細胞、NTera 2細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞

NCI-H1048細胞類似產(chǎn)品：：TE 85.T細胞、CMT 167細胞、RAG細胞

HDF-a細胞類似產(chǎn)品：：MDA-330細胞、HCC-38細胞、MILE SVEN 1細胞

ASH-3細胞類似產(chǎn)品：：H-1703細胞、SW756細胞、NCI-H2342細胞

HuNS1細胞類似產(chǎn)品：：HHFK細胞、MPASMC細胞、ACHN細胞

KE-37細胞類似產(chǎn)品：：KE39細胞、6-T CEM細胞、HM1900細胞

SUDHL-10細胞類似產(chǎn)品：：MDCC-MSB-1細胞、HPAC細胞、MDA-MB415細胞

CCRF細胞類似產(chǎn)品：：EC9706細胞、SP2/0 Ag-14細胞、EA hy 926細胞

VK2細胞類似產(chǎn)品：：COR-L26細胞、H2170細胞、H2171細胞

SUM149PT細胞類似產(chǎn)品：：HCC1954細胞、hTERT RPE1細胞、HEK293-F細胞

UM-UC3細胞類似產(chǎn)品：：HEC1A細胞、H1299細胞、HD-LM-2細胞

He-La細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1703細胞、J 82細胞、THP1細胞

NRK 52E細胞類似產(chǎn)品：：OVCAR8細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞、GC-1細胞

MC3T3-E1 Subclone 24細胞類似產(chǎn)品：：H1666_DA細胞、526mel細胞、Lung cancer-1/squamous細胞

SW1116細胞類似產(chǎn)品：：KYSE0520細胞、HT-1197細胞、NCI-H719細胞

ARO 81-1細胞類似產(chǎn)品：：FHCRC-11細胞、MV-3細胞、CNE-2Z細胞

KATOIII細胞類似產(chǎn)品：：NCI-841細胞、Z310細胞、NIH:OVCAR-4細胞

RKO_AS45細胞類似產(chǎn)品：：NCL-H548細胞、X63-Ag8.653細胞、Saos2細胞

CHL1細胞類似產(chǎn)品：：MBMEC細胞、NCI-H220細胞、MDA157細胞

HFLS細胞類似產(chǎn)品：：MPC11細胞、HCC-9204細胞、HEM細胞

SK-RC-39細胞類似產(chǎn)品：：PE/CA-PJ34細胞、Huh 7.5.1細胞、GM03571細胞

SF17細胞類似產(chǎn)品：：HCC2157細胞、IPLB-SF-21-AE細胞、Mouse Forestomach Carcinoma細胞

H-1792細胞類似產(chǎn)品：：Detroit 562細胞、NPC-TW 039細胞、DKMG細胞

B-104細胞類似產(chǎn)品：：COLO-320DM細胞、SaOS細胞、RMS 13細胞

MS1細胞類似產(chǎn)品：：H1522細胞、MS-751細胞、YES-2細胞

VSC4.1細胞類似產(chǎn)品：：UCH-1細胞、KE-37細胞、118 MG細胞

HFLS-OA細胞類似產(chǎn)品：：HFF-1細胞、L5178-R細胞、COV 434細胞

DoHH2細胞類似產(chǎn)品：：VMRCRCZ細胞、KYSE 180細胞、H-2291細胞

Co 115細胞類似產(chǎn)品：：COLO829細胞、JHH7細胞、NCIH1688細胞

BC-025細胞類似產(chǎn)品：：Ramos G6.C10細胞、Human Microglia Clone 3細胞、NCI-H748細胞

CD 18細胞類似產(chǎn)品：：KU1919細胞、Earle's L cells細胞、HR-8348細胞

VMM5A細胞類似產(chǎn)品：：CX-1細胞、Fox/NY細胞、7860細胞

no.11細胞類似產(chǎn)品：：HCE-2 [50.B1]細胞、THC-8307細胞、HCA-7細胞

CCF-STTG1細胞類似產(chǎn)品：：MT-2J細胞、ME 180細胞、NCI-H1184細胞

SNU1040細胞類似產(chǎn)品：：16HBE14o-細胞、PLA-801D細胞、RSC 96細胞

SCC VII細胞類似產(chǎn)品：：AN3-CA細胞、Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞、MFE296細胞

MC38細胞類似產(chǎn)品：：QG56細胞、H-1238細胞、OCM1A細胞

HCC1008細胞類似產(chǎn)品：：HCC1588細胞、REC細胞、SNU-16細胞

K7M2細胞類似產(chǎn)品：：GM03569D細胞、Pro-Lec1.3C細胞、NCI-H1092細胞

CoC1細胞類似產(chǎn)品：：D324細胞、L540細胞、74Int細胞

MKN-74細胞類似產(chǎn)品：：RMS 1598細胞、IHHA-1細胞、alpha-TC1-6細胞

SRS-82細胞類似產(chǎn)品：：BIC-1細胞、MDA-MB415細胞、UMNSAH-DF-1細胞

SGC 7901細胞類似產(chǎn)品：：U-2932細胞、UK Pan-1細胞、P30/0HK細胞

MES 13細胞類似產(chǎn)品：：MCA38細胞、HLEB-3細胞、SUM 149PT細胞

Capan1細胞類似產(chǎn)品：：SK-RC-20細胞、UWB1-289細胞、HRMC細胞

Panc327細胞類似產(chǎn)品：：KPL-1細胞、BEL-7402細胞、COLO-320HSR細胞

D-283MED細胞類似產(chǎn)品：：293 Ad5細胞、KMS-18細胞、P3-NS1/1-Ag4-1細胞

H82細胞類似產(chǎn)品：：FRTL-5細胞、H596細胞、OCM-1細胞

DMS273細胞類似產(chǎn)品：：CF PAC-1細胞、CC-LP-I細胞、P-815細胞

2PK3細胞類似產(chǎn)品：：NIH 3T6細胞、Lewis-Lung細胞、NTERA2D1細胞

GTL-16細胞類似產(chǎn)品：：H35 Reuber細胞、SNG-M細胞、Colo205細胞

Hs 274細胞類似產(chǎn)品：：CFPAC-1細胞、TK-10細胞、AML 12細胞

MILE SVEN 1細胞類似產(chǎn)品：：AN3 CA細胞、Ha Fe細胞、GM04154細胞

HMy2.CIR細胞類似產(chǎn)品：：P3X63 Ag8.653細胞、OCI/AML3細胞、MC-38細胞

NOK細胞類似產(chǎn)品：：Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞、RPMI 1846細胞、DoHH2細胞

OVCAR-10細胞類似產(chǎn)品：：IAR20細胞、NK-92MI細胞、Hs 895.T細胞

SW900細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H510細胞、HCA7細胞、BxPC-3細胞

D10細胞類似產(chǎn)品：：HDLM2細胞、ACC-2細胞、AAV293細胞

REC1細胞類似產(chǎn)品：：MKN-7細胞、HEMCSS細胞、CEM clone 7細胞

NCI H157細胞類似產(chǎn)品：：Hs-606-T細胞、HPAF/CD18細胞、KGN細胞

MD Anderson-Metastatic Breast-231細胞類似產(chǎn)品：：95D細胞、Hs 940.T細胞、UACC812細胞

hTERT RPE1細胞類似產(chǎn)品：：RPMI-8226細胞、MHCC97-H細胞、H-2108細胞

SW-1573細胞類似產(chǎn)品：：MDBK (NBL-1)細胞、IM 9細胞、NR 8383細胞

BV173細胞類似產(chǎn)品：：RGC-5細胞、RBL.2H3細胞、HS-445細胞

HCC0827細胞類似產(chǎn)品：：RPMI-8402細胞、3 LL細胞、IBRS-2細胞

H1792細胞類似產(chǎn)品：：IM9細胞、Caco-2BBe細胞、MRC-V細胞

HO-8910 PM細胞類似產(chǎn)品：：CL-40細胞、H-2227細胞、NCI-H345細胞

HEK293-F:人胚腎復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

TKB1細胞類似產(chǎn)品：：Anip[973]細胞、GM05862細胞、NCI-H1694細胞

FU-MMT-1細胞類似產(chǎn)品：：KG-1a細胞、H-522細胞、SK-Mel 2細胞

SK Col 1細胞類似產(chǎn)品：：KOSC-2細胞、NCIH2228細胞、NCI H929細胞

IOSE80細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H69C細胞、Jurkat E6-1細胞、MGECs細胞

H676細胞類似產(chǎn)品：：HCC38細胞、SKMES-1細胞、BC-025細胞

DHL6細胞類似產(chǎn)品：：KASUMI6細胞、C22細胞、LM(TK-)細胞

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