RNA 提取試劑盒 （純化柱型） 

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

RNA 提取試劑盒（純化柱型）是一款利用 RNA 純化柱與相關(guān)裂解-漂洗緩沖液組成的 RNA 提取系統(tǒng)，同時(shí)利用 gDNA 去除柱去除基因組 DNA，快速提取高純度的 RNA。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸與保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 本產(chǎn)品可以快速（20 min）提取 RNA。

2. gDNA 去除柱可以有效去除基因組 DNA，得到高純度的 RNA。

3. 本試劑盒無(wú)需酚/ 氯仿抽提，及氯化鋰或異丙醇沉淀，顯著提高實(shí)驗(yàn)操作的安全性。

四、自備試劑與耗材。

無(wú)水乙醇，70%乙醇，RNase-free EP 管（1.5 mL）和槍尖。

五、使用說(shuō)明。

1. 試劑配制。在 Wash Buffer B（漂洗液）中加入 35 mL 無(wú)水乙醇，混勻。

2. 細(xì)胞和組織裂解。

1) 細(xì)胞裂解。

a) 貼壁細(xì)胞裂解。胰酶消化法收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，按照細(xì)胞數(shù)量添加一定體積的裂解液，混勻，室溫裂解 3 min?；蚋鶕?jù)細(xì)胞培養(yǎng)皿大小，直接加入裂解液，吹打混勻，轉(zhuǎn)移到 EP 管中，室溫裂解 3 min。

b) 懸浮細(xì)胞裂解。離心收集懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)，按照細(xì)胞數(shù)目添加一定體積的裂解液，混勻，室溫裂解 3 min。

2) 動(dòng)物組織裂解。組織塊稱重后加入液氮冷凍，研磨成粉末后轉(zhuǎn)入 EP 管，加入裂解液，劇烈震蕩（vortex）20 秒；或?qū)⒔M織塊加入裂解液中，利用手持式勻漿器破碎組織，室溫裂解 3 min，再12,000×g，4℃離心 3 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管，即為組織裂解液。

3. 將細(xì)胞裂解液或組織裂解液上清轉(zhuǎn)入 gDNA 去除柱，12, 000×g，4℃離心 30 sec，棄 gDNA 去除柱，保留濾液（含有 RNA）。

4. 向?yàn)V液中加入等體積的 70%乙醇，混勻，轉(zhuǎn)入 RNA 純化柱，12,000×g，4℃離心 30 sec，棄濾液。

5. 向 RNA 純化柱中加入 500 μL Wash Buffer A（去蛋白液），12,000×g，4℃離心 30 sec，棄濾液。

6. 向 RNA 純化柱中加入 500 μL Wash Buffer B（漂洗液），12,000×g，4℃離心 2 min，棄濾液。

7. 將 RNA 純化柱插入新的 RNase-free 的 EP 管中，向柱中央滴加 100 μL Elution Buffer R （洗脫液）或 RNase-free ddH2O，室溫靜置 2 min。

8. 12,000×g，4℃離心 2 min，得到 RNA 溶液，立即用于反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，或保存于-80 ℃冰箱中。

六、注意事項(xiàng)。

1. RNA 易降解，請(qǐng)?jiān)诘蜏貤l件下提取 RNA。

2. 本產(chǎn)品提取的 RNA 包括 28 s 和 18 s RNA，不含 5 s RNA。因此，本產(chǎn)品不用于 microRNA 提取。