"HCC827:人非小細胞肺癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

Calu 3細胞類似產(chǎn)品：：MV-1-Lu細胞、SW780細胞、RT4-D6-P2T細胞

COV434細胞類似產(chǎn)品：：SRS-82細胞、NWA細胞、FL83B細胞

NCI-H-69細胞類似產(chǎn)品：：DHL-8細胞、HCT116細胞、Fao細胞

SU4細胞類似產(chǎn)品：：NW38細胞、MCA-38細胞、CAL-39細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：這株細胞建于１９９４年三月。這株肺腺癌在EGFR酪酸激酶區(qū)域有一個獲得性突變(E７４６-A７５０缺失)?；颊咴冢玻禋q到２６歲時每個月抽１包煙。在診斷前１２年不再抽煙。

HCC827:人非小細胞肺癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

FRTL-5 Cl 2細胞類似產(chǎn)品：：P3X63Ag8.653細胞、HUCEC細胞、MCF-7/AdrR細胞

SUM-159細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1341細胞、HS5細胞、JurkatE6-1細胞

HDSMC細胞類似產(chǎn)品：：LTEPsm細胞、MHH-CALL-2細胞、Kit 225-K6細胞

細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：傳代培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以１：２或１：２以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞，可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟：①入無菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒雙手；②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液３７℃下預熱；③超凈臺臺面應整潔，用７５%酒精棉球擦拭清潔；④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面２０min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風機清潔空氣除去臭氧；⑤點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；⑥將培養(yǎng)用液瓶口用７５%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每個大培養(yǎng)瓶加入１ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋HAO瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化HAO的細胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋HAO瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO２的進入，將培養(yǎng)瓶放回CO２培養(yǎng)箱；⑩對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟７-９不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。

細胞傳代方法：消化５分鐘。１：２。４-５天長滿。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

HCC827:人非小細胞肺癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁生長

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復吹打。

293GP細胞類似產(chǎn)品：：BT.549細胞、H-23細胞、R3/1細胞

H3255細胞類似產(chǎn)品：：RCC-4細胞、KP4細胞、KU-812F細胞

KLM-1細胞類似產(chǎn)品：：RPE1細胞、KALS1細胞、MEL細胞

C81-61細胞類似產(chǎn)品：：JB 6細胞、Hs 445細胞、Panc8.13細胞

SK Col 1細胞類似產(chǎn)品：：KOSC-2細胞、NCIH2228細胞、NCI H929細胞

SKNFI細胞類似產(chǎn)品：：Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞、NCI-H1155細胞、WBF344細胞

H-889細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1930細胞、NS-I/1細胞、SCL-1細胞

RBL-2H3細胞類似產(chǎn)品：：EFM192B細胞、KB細胞、C4-2 Bone metastatic細胞

CAL 27細胞類似產(chǎn)品：：NIH:OVCAR-4細胞、OCI Ly19細胞、H1373細胞

28SC細胞類似產(chǎn)品：：CCC-ESF-1細胞、HEC1A細胞、COLO201細胞

H4細胞類似產(chǎn)品：：M1細胞、RPMI-2650細胞、SNU761細胞

SNU-449細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2347細胞、PE/CA-PJ34 (clone C12)細胞、TPC1細胞

Hep-G2細胞類似產(chǎn)品：：Emory University-2細胞、FK81細胞、CCC-HSF-1細胞

SU.86.86細胞類似產(chǎn)品：：D6P2T細胞、U031細胞、IMR90細胞

NCI-H1650細胞類似產(chǎn)品：：P30/0HK細胞、Normal fibroblast-10細胞、SKRC-42細胞

HPAF2細胞類似產(chǎn)品：：EB-2細胞、NCI-H1373細胞、NCIH358細胞

SKM1細胞類似產(chǎn)品：：QBC-939細胞、KBM-5細胞、NCIH647細胞

S3-HeLa細胞類似產(chǎn)品：：Hi-five細胞、RPTEC/TERT 1細胞、HNTEC細胞

P3/NSI/1-AG4-1細胞類似產(chǎn)品：：SW 1088細胞、Alexander細胞、CAL-148細胞

Huh-7.5細胞類似產(chǎn)品：：HEK 293-H細胞、NCI-H510細胞、MA104細胞

H-596細胞類似產(chǎn)品：：H-661細胞、CAL62細胞、Tb1Lu細胞

A375SM細胞類似產(chǎn)品：：PBMC細胞、MKN-7細胞、SLMT1細胞

OV433細胞類似產(chǎn)品：：HMO6細胞、SH-SY5Y細胞、RSC96細胞

CMT 167細胞類似產(chǎn)品：：LLC-PK(1)細胞、VERO76細胞、RL95-2細胞

HCC827:人非小細胞肺癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

RBL 1細胞類似產(chǎn)品：：DMS79細胞、NIH-OVCAR-3細胞、HeLa S-3細胞

SW-1417細胞類似產(chǎn)品：：Jurkat FHCRC細胞、NCI-H889細胞、JURKAT E-6.1細胞

102PT細胞類似產(chǎn)品：：KMH2細胞、COLO 16細胞、C2C12細胞

HEL 299細胞類似產(chǎn)品：：H2085細胞、MM.1S細胞、L-5178-Y細胞

H9c2細胞類似產(chǎn)品：：DU_145細胞、HOS(TE85)細胞、FOX-NY細胞

RT4P細胞類似產(chǎn)品：：Hep 3B2細胞、DMS153細胞、FRhK-4細胞

SW-579細胞類似產(chǎn)品：：OCI/AML3細胞、M-G63細胞、MAVER細胞

ACC3細胞類似產(chǎn)品：：SU.86細胞、Detroit562細胞、OC-316細胞

SU8686細胞類似產(chǎn)品：：BRL3A細胞、PANC-28細胞、LuCL4細胞

HEC-151細胞類似產(chǎn)品：：HepG2-luc細胞、H358細胞、T2 (174 x CEM.T2)細胞

HMVEC細胞類似產(chǎn)品：：NCI H226細胞、MCF12A細胞、H4細胞

PLC/PRF5細胞類似產(chǎn)品：：KYSE 510細胞、SUPB15細胞、LC1sq細胞

PF382細胞類似產(chǎn)品：：FRTL-5 Cl 2細胞、RWPE1細胞、PC 61 5.3細胞

ARH77細胞類似產(chǎn)品：：H-9細胞、SNU407細胞、P19細胞

Hs-578-T細胞類似產(chǎn)品：：H2196細胞、OKa-C-1細胞、H-2228細胞

MOLT 3細胞類似產(chǎn)品：：BC-009細胞、OAW-42細胞、LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞

M07e細胞類似產(chǎn)品：：BS-C-1細胞、SW 1271細胞、LTEPsm細胞

SUM102PT細胞類似產(chǎn)品：：H-920細胞、TE 354.T細胞、Chang liver細胞

D341Med細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2405細胞、U20S細胞、MDA-MB-157細胞

BT483細胞類似產(chǎn)品：：SN-12C細胞、RPMI8226/S細胞、NCI-H1648細胞

Mo 59J細胞類似產(chǎn)品：：GA-10 clone 4細胞、HuTu 80細胞、Ca759細胞

MH-S細胞類似產(chǎn)品：：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞、PC12(高分化)細胞、KE39細胞

NCI-H1581細胞類似產(chǎn)品：：ROS1728細胞、NCI-SNU-C2A細胞、GBC-SD細胞

TR-146細胞類似產(chǎn)品：：MDA-231細胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細胞、CHO細胞

COLO-320-DM細胞類似產(chǎn)品：：GEO細胞、KYSE-520細胞、SW1353細胞

HCT.116細胞類似產(chǎn)品：：SO-Rb 50細胞、P3-X63-Ag8-653細胞、SHSY-5Y細胞

TCC Sup細胞類似產(chǎn)品：：Hs 695.T細胞、OCI-Ly01細胞、OCILY10細胞

MES-SA細胞類似產(chǎn)品：：MCF-12A細胞、SUNE 1細胞、6-10B細胞

KMH2細胞類似產(chǎn)品：：SKNBE(2)細胞、ARIP細胞、PG-4 (S+L-)細胞

Nb 2細胞類似產(chǎn)品：：3T3F442A細胞、A-549細胞、G401細胞

WEHI 3細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H292細胞、Hs27F細胞、Clone 15 HL-60細胞

NCI-H1404細胞類似產(chǎn)品：：THP-1細胞、159PT細胞、XWLC-05細胞

HEL-1細胞類似產(chǎn)品：：SCC 4細胞、Adeno-293細胞、H2052細胞

CFSC-8B細胞類似產(chǎn)品：：L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞

E6-1細胞類似產(chǎn)品：：FRhK-4細胞、293 c18細胞、143 B細胞

GM03569細胞類似產(chǎn)品：：UCLA NPA-87-1細胞、BERH-2細胞、MC3T3-E1細胞

NCIH1915細胞類似產(chǎn)品：：SW260細胞、K7M2 wt細胞、HBSMC細胞

KLM1細胞類似產(chǎn)品：：EU-4細胞、HEK293-A細胞、COLO.205細胞

SaOS-2細胞類似產(chǎn)品：：A2058細胞、HO8910PM細胞、LNCaP-FGC細胞

BI-Mel細胞類似產(chǎn)品：：KHYG-1細胞、SkChA1細胞、SW.620細胞

Psi2-DAP細胞類似產(chǎn)品：：Ca759細胞、UACC812細胞、TC-1[JHU-1]細胞

Hs 578.Bst細胞類似產(chǎn)品：：H-2107細胞、MPC-5細胞、HL-60細胞

H-1792細胞類似產(chǎn)品：：Detroit 562細胞、NTERA-2 clone D1細胞、HuPT3細胞

HBL 100細胞類似產(chǎn)品：：RKOE6細胞、HCT 8細胞、ZR751細胞

WM115mel細胞類似產(chǎn)品：：Panc203細胞、HTori-3.1細胞、UCLA RO-81A-1細胞

PaTu 8988s細胞類似產(chǎn)品：：22Rv1細胞、HK2細胞、NCTC 929細胞

MOLT.4細胞類似產(chǎn)品：：H295細胞、A2780S細胞、DCS細胞

ST 486細胞類似產(chǎn)品：：HCEC-B4G12細胞、KLN 205細胞、BMF細胞

SaOS細胞類似產(chǎn)品：：EA.Hy926細胞、RPMI #8226細胞、CWR22R-V1細胞

MC38細胞類似產(chǎn)品：：QG56細胞、H-1238細胞、OCM1A細胞

Becker細胞類似產(chǎn)品：：WI38細胞、L cell line細胞、PCI:SG231細胞

Vero-76細胞類似產(chǎn)品：：Jurkat Clone E6-1細胞、KMS26細胞、NCIH1694細胞

Rat Basophilic Leukemia-1細胞類似產(chǎn)品：：Sp2/O-Ag14細胞、PG-LH7細胞、CAL-27細胞

H-157細胞類似產(chǎn)品：：U266 B1細胞、NCI-H1876細胞、Panc10.05細胞

SK_N_FI細胞類似產(chǎn)品：：UMUC1細胞、SUDHL4細胞、HMC-1細胞

HFF細胞類似產(chǎn)品：：MAEC細胞、HuH 6細胞、P3.653細胞

MOLM-14細胞類似產(chǎn)品：：C-643細胞、OCI-Ly07細胞、PANC0203細胞

Medical Research Council cell strain-9細胞類似產(chǎn)品：：NCIH441細胞、T24(ECV304)細胞、H4-II-E-C3細胞

Medical Research Council cell strain-9細胞類似產(chǎn)品：：NCIH441細胞、T24(ECV304)細胞、H4-II-E-C3細胞

NCI-H1693細胞類似產(chǎn)品：：MARC 145細胞、RCK8細胞、Hs888Lu細胞

Huh-7.5細胞類似產(chǎn)品：：HEK 293-H細胞、NCI-H510細胞、MA104細胞

PLCPRF5細胞類似產(chǎn)品：：SCL-II細胞、QBC939細胞、L929(NCTC)細胞

D-283MED細胞類似產(chǎn)品：：293 Ad5細胞、KMS-18細胞、P3-NS1/1-Ag4-1細胞

OC-316細胞類似產(chǎn)品：：ZR75_1細胞、HT-115細胞、alpha-TC1.6細胞

293T/17細胞類似產(chǎn)品：：SU-DHL-16細胞、IPEC1細胞、H1693細胞

HuCC-T1細胞類似產(chǎn)品：：HOP 62細胞、P3HR1-BL細胞、H-209細胞

G 292 Clone A 141B1細胞類似產(chǎn)品：：T-HEECs細胞、COV504細胞、X63-AG 8.653細胞

NCI-H2347細胞類似產(chǎn)品：：KATO III細胞、32D/cl3細胞、KAT-5細胞

LSC-1細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1703細胞、NIH 3T3細胞、CF-1 MEF細胞

C3H/10T1/2 CL8細胞類似產(chǎn)品：：MT4細胞、NUGC3細胞、MCF.10A細胞

LWnt-3A細胞類似產(chǎn)品：：A549 ATCC細胞、Epstein-Barr-3細胞、DMS 114細胞

H-2444細胞類似產(chǎn)品：：CAL85-1細胞、PA-1細胞、NCI-H1341細胞

NL-20細胞類似產(chǎn)品：：RERF-LC-MS細胞、9L細胞、Hs832.Tc細胞

Karpas-299細胞類似產(chǎn)品：：HCM細胞、SHIN-3細胞、Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞

EBNA293細胞類似產(chǎn)品：：HSC-I細胞、OV-1063細胞、MiaPaCa2細胞

RH7777細胞類似產(chǎn)品：：KALS-1細胞、HCC-827細胞、NCI-128細胞

YAC-1細胞類似產(chǎn)品：：THLE-3細胞、Hu-P-T3細胞、THP 1細胞

TOV112細胞類似產(chǎn)品：：SKHEP-1細胞、DU145細胞、Hs683細胞

293A細胞類似產(chǎn)品：：WC00044細胞、A-2058細胞、4175細胞

HUT 28細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1666細胞、SNU-475細胞、MEG-01細胞

P31 FUJ細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB453細胞、PAMC82細胞、NT2/D1細胞

JB6 clone 30, subclone 7b細胞類似產(chǎn)品：：JB6 Cl 30細胞、RS4;11細胞、RC92A細胞

HCC827:人非小細胞肺癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

YD15細胞類似產(chǎn)品：：Hs940T細胞、Emory University-2細胞、SKNO-1細胞

AN-3細胞類似產(chǎn)品：：U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞

Nb-2細胞類似產(chǎn)品：：C666-1細胞、SK MEL 5細胞、CL40細胞

A2780/CP細胞類似產(chǎn)品：：HGC-27細胞、Hs-746T細胞、SNU-601細胞

HARA-B細胞類似產(chǎn)品：：HUCCT1細胞、MARC145細胞、DR2R1610細胞

WSU-DLCL(2)細胞類似產(chǎn)品：：MDCK細胞、V 79-4細胞、HCV 29細胞

"