Ethidium homodimer (EthD-1) is a high-affinity fluorescent nucleic acid dye commonly used to stain mammals, bacteria, yeast, and fungi. Ethidium homodimer binds to DNA or RNA, enhancing fluorescence more than 30 times. The Ethidium homodimer has a strong positive charge, so it cannot cross cell membranes and stain living cells; But the Ethidium homodimer can cross the disordered region of the dead cell membrane to reach the nucleus and embed the DNA double strand to produce red fluorescence. Therefore, Ethidium homodimer is a relatively sensitive nucleic acid stain that can accurately detect nucleic acids in solution or in decomposing cells. Ethidium homodimer binds DNA, Ex/Em=528/617 nm^[1].

使用方法
EthD-1 工作液的配制
1.1 制備儲(chǔ)存液
用 DMSO 配制 2 mM 的 EthD-1。
注：EthD-1 儲(chǔ)存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
1.2 配制工作液
用預(yù)熱好的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基或 PBS 稀釋儲(chǔ)存液，配制成 0.1-10 μM 的 EthD-1 工作液。
注：請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整 EthD-1 工作液濃度，且現(xiàn)用現(xiàn)配。

細(xì)胞染色
2.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶消化細(xì)胞。離心棄去上清后，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。
注：若不做流式實(shí)驗(yàn)，貼壁細(xì)胞可做爬片染色。
2.2 加入 1 mL EthD-1 工作液，室溫孵育 15-60 分鐘。
2.3 400 g，4℃ 離心 3-4 分鐘，棄去上清。
2.4 加入 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次 5 分鐘。
2.5 用 1 mL 無(wú)血清培養(yǎng)基或 PBS 重懸細(xì)胞后，在熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀下檢測(cè)。

注意事項(xiàng)
1. EthD-1 儲(chǔ)存液建議分裝后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存，避免反復(fù)凍融。-20℃ 可保存 1 個(gè)月，-80℃ 可保存半年。
2. 請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整 EthD-1 工作液濃度。
3. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

856.75

C₄₆H₅₀Cl₄N₈

61926-22-5

固體

Red to reddish brown

溴乙啡錠二聚體1

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

• [1]. Joshua R Edwards, et al. A novel method for the evaluation of proximal tubule epithelial cellular necrosis in the intact rat kidney using ethidium homodimer. BMC Physiol. 2007 Feb 23;7:1.  [Content Brief]