9002-04-4
中文名稱
凝血酶
英文名稱
Thrombin
CAS
9002-04-4
分子式
NULL
更新日期
2024/11/01 15:54:06
基本信息
中文別名
凝血酶凝血酵素
凝血醇素
凝血酶 人
IIA 因子
凝血酶來自人體
凝血酶,牛血漿
血液凝血因子3
凝血酶(牛血漿)
凝血酶,凝血因子
英文別名
C00752THROMBIN
FACTOR IIA
EC 3.4.21.5
thrombin time
BOVINE THROMBIN
THROMBIN, BOVINE
COAGULATION FACTOR IIA
thrombin from human plasma
Thrombin from bovine plasma
所屬類別
生物化學品: 酶類: 治療用酶物理化學性質(zhì)
外觀性狀凝血酶為牛血或豬血中提取的凝血酶原，經(jīng)激活而得凝血酶的無菌凍干品，為白色或類白色的凍干塊狀物或粉末。干粉在2～80C儲存很穩(wěn)定，干粉易溶于水，0.9％的氯化鈉溶液顯渾濁，不溶于有機溶劑。在室溫水溶液8h內(nèi)失活。故須臨用時新鮮配制，遇熱、稱酸、堿、金屬等活力降低。
熔點47.7 °C
儲存條件−20°C
溶解度H2O: 1 mL/vial clear to slightly hazy, colorless solution
形態(tài)powder
顏色white
Merck13,9461
EPA化學物質(zhì)信息Thrombin(9002-04-4)
安全數(shù)據(jù)
警示詞危險
危險性描述H315-H319-H334-H335
危險品標志Xn,B,Xi
危險類別碼36/37/38-42
WGK Germany2
RTECS號XO8950000
TSCAYes
海關(guān)編碼30021099
制備方法
方法1
原料處理、沉淀取豬血液2kg，加入枸櫞酸鈉（38g/L即3.8%)溶液200ml抗凝，混勻，離習分離，取出上清液血漿，在血漿加入10倍于血漿量的蒸餾水稀釋，用300ml乙酸（1％）調(diào)節(jié)Ph為5.3，待沉淀完全，于離心機中離心5～10min，棄去離心液，收集沉淀，得凝血酶原。動物血液枸櫞酸鈉→原料處理血漿蒸餾水：HAc;Ph5.3→沉淀凝血酶原
分離、沉淀、洗滌取凝血酶原，在25～ 30C0下，加入氯化鈉（0.9%)的溶液700ml,使之溶解，再在每升溶液中加入15g氯化鈣，充分攪拌10min，使之溶解，冷室置1h，離心分離，取上清液加等量冷凍丙酮，攪拌均勻后，靜置過夜。離心分離，沉淀再加冷凍丙酮研細，冷室放置2～ 3d,過濾，得沉淀后用乙醚洗滌，真空干燥，即得粗制凝血酶，約10g。
凝血酶原NaCl;CaCl2;丙酮→分離；沉淀沉淀乙醚→洗滌粗制凝血酶
除雜質(zhì)、沉淀、干燥在粗制凝血酶中加入200ml氯化鈉液（9g/L），使之溶解，溶解后00C放置6h，過濾，取沉淀再加150ml氯化鈉液（9g/L）重復(fù)以上操作1次，合并兩次濾液。用乙酸（1%)調(diào)節(jié)Ph至5.5。離心分離，沉淀棄去，取上清液加入2倍于上清液量的冰凍丙酮，靜置2h，待沉淀完全，離心分離，沉淀用冷凍丙酮研細，放置24h，濾去溶液。沉淀分別用無水乙醇、乙醚洗滌，真空干燥，即得精致凝血酶，約0.4g。粗制凝血酶NaCl;HAc;^0<0C;pH5.5→濾液丙酮→沉淀干燥精制成品
應(yīng)用領(lǐng)域
參考質(zhì)量標準
▼
▲
中國藥典2000年版1056頁
指標名稱
指標
指標名稱
指標
效價/(單位/mg)
≥10/干燥失重/%＠≤3.0
含凝血酶
≥標示量的80％
無菌
符合規(guī)定
常見問題列表
概述
凝血酶，一種使纖維蛋白原水解成為纖維蛋白的蛋白酶，由308個氨基酸殘基組成，且是雙鏈分子，含有A鏈和B鏈，兩鏈間由二硫鍵連接，其中，A鏈含49個氨基酸殘基，又稱輕鏈，B鏈由259個氨基酸殘基組成，又稱重鏈；本品存在于動物血液中，通常以無活性的酶原形式存在，能直接作用于凝血過程的最后環(huán)節(jié)，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，加速血液凝固，起到快速止血的作用；能激活凝血因子Ⅷ，使可溶性纖維蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)殡y溶性纖維蛋白而形成凝血塊，達到止血目的；可增強凝血因子Ⅷ和Ⅴ的活性，在鈣和磷脂的參與下，促進凝血酶因子Xa，使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?；能促進血小板發(fā)生不可逆性的聚集和血小板釋放反應(yīng)，加速血液凝固；還可促進上皮細胞的有絲分裂，使創(chuàng)傷愈合時間縮短30%～50%；因此，常用于結(jié)扎止血困難的小血管、毛細血管以及實質(zhì)性臟器出血的止血，也可用于外傷、手術(shù)、口腔科、耳鼻喉科、泌尿科、婦產(chǎn)科以及消化道等部位的出血。理化性質(zhì)
白色類白色的凍干塊狀或粉末，易溶于水，不溶于有機溶劑。結(jié)構(gòu)組成
由308個氨基酸殘基組成的蛋白它是雙鏈分子，含有A鏈和B鏈，兩鏈間由二硫鍵連接。A鏈含49個氨基酸殘基，又稱輕鏈; B鏈由259個氨基酸殘基組成，又稱重鏈。A鏈氨基末端氨基酸是蘇氨酸(Thr);而 B鏈氨基末端氨基酸是異亮氨酸 (Ile), 其最初的 4個氨基酸殘基是異亮氨酸-頡氨酸-谷氨酸-甘氨酸(Ile-Val-Glu-Gly。藥理作用
凝血酶在體內(nèi)以凝血酶原形式存在, 在凝血過程中, 凝血酶原復(fù)合物將其激活而轉(zhuǎn)變?yōu)橛薪z氨酸蛋白類水解活性的凝血酶。 凝血酶的形成在凝血過程中起到了中心作用。 凝血酶形成后的作用至少包括以下5個方面：(1)啟動：一旦凝血酶形成后, 便可迅速啟動以后階段的止凝血過程, 包括作為促凝劑激活血小板、內(nèi)皮細胞, 并激活因子 V、Ⅶ 、Ⅷ 。
(2)放大；凝血反應(yīng)的放大是通過促凝酶復(fù)合物在內(nèi)皮下基質(zhì)和周圍血細胞表面合成而實現(xiàn)的。 其中, 凝血反應(yīng)的放大主要是通過 α-凝血酶的激活來完成, 同時, 凝血的放大反應(yīng)相又可促使生成更多的 α-凝血酶, 并在血管受損傷處形成穩(wěn)定的血栓, 從而終止血液丟失。
(3)血塊形成的終止：血塊形成的終止至少涉及兩個連續(xù)的抑制過程和一個動力學抑制過程。 前者主要是蛋白酶抑制劑 AT-Ⅲ 系統(tǒng)和組織因子途徑抑制物(TFPI)系統(tǒng) 。 而動力學抑制系統(tǒng)則是通過蛋白 C途徑進行的。 在蛋白 C途徑中, 首先是 APC的生成, 而 APC的形成則是通過 α-凝血酶與血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin, TM)所形成的復(fù)合物, 即 α-凝血酶-TM使 PC變?yōu)?APC。通過這一動力學抑制系統(tǒng)可滅活凝血酶原酶和內(nèi)源性凝血酶成分, 主要是輔因子蛋白如因子 Va和Ⅷ a的活性, 從而參與終止血塊的形成。
(4)血塊的清除：血塊的清除是組織修復(fù)過程中的基本步驟, 同時要求纖溶酶的參與。 凝血酶對這一過程的調(diào)控是通過影響纖溶而間接對其產(chǎn)生影響的。 通過 TM-α-凝血酶復(fù)合物產(chǎn)生的 TAFIa可降低由 tPA及纖維蛋白激活谷氨酸纖溶酶原的速率, 保護纖維蛋白免受降解。 在 APC存在時, α-凝血酶的生存可顯著減少, 同時降低 TAFIa的激活。
(5)修復(fù)：對損傷組織的修復(fù)是凝血過程的最后一步。 這一過程需要纖溶酶激活金屬蛋白酶, 后者可使受損的細胞外基質(zhì)降解, 并促使新生細胞遷移至受損傷部位。 在這一過程中, 凝血酶是一種強有力的生長因子和趨化吸引劑, 其對成纖維細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞有激活效應(yīng);α-凝血酶可激活血小板, 使血小板釋放血管活性物和生長因子, 促進不同類型的細胞增殖和生長。
圖1為凝血酶凍干粉
分離提純
1.粗凝血酶的分離粗凝血酶的提取即去除血漿中的纖維蛋白原等雜蛋白, 同時保留凝血因子, 有利于凝血酶原的激活。 凝血酶原本身沒有活性, 不能將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白, 只有將其激活成凝血酶后才能在凝血級聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮作用。
(1)凝血酶原的提?。耗冈奶崛⊥ǔ２捎?3種方法:等電點沉淀法、檸檬酸鋇吸附法和氫氧化鎂吸附法。
等電點沉淀法根據(jù)蛋白質(zhì)在溶液 pH為其等電點的條件下溶解度最低的原理, 用 1%的醋酸將適當稀釋后的血漿 pH調(diào)至凝血酶的等電點 5.0～ 5.5之間, 靜置分層后離心, 緩沖液溶解沉淀后即得粗凝血酶原溶液。
檸檬酸鋇吸附法則根據(jù)檸檬酸鋇能吸附依賴于維生素 K的凝血因子這一特性, 在檸檬酸鈉抗凝獲得的血漿中加入氯化鋇產(chǎn)生檸檬酸鋇, 凝血酶原等因子隨之沉淀分離出來, 沉淀用EDTA解吸, 再離心去沉淀后獲得粗凝血酶原溶液。
氫氧化鎂吸附法由 Seeger首次報道, 以等電點沉淀法為基礎(chǔ), 沉淀用氫氧化鎂吸附溶解的沉淀物, 以二氧化碳洗脫凝血酶原, 再加硫酸銨至 65%飽和度沉淀凝血酶原。
以上 3種方法相比, 等電點沉淀法操作較簡便, 應(yīng)用較多,但得到的粗凝血酶活性不高;后兩種方法得到的粗凝血酶活性較前者有所提高, 但操作比較繁瑣。
(2)凝血酶原激活：生理條件下 , 凝血酶由凝血酶原在凝血因子Ⅹa、凝血因子 V、Ca2+和磷脂作用下激活生成。 在缺乏某些激活因子的情況下, 也能將凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶, 但是轉(zhuǎn)化率很低。 在從血漿中提取凝血酶的過程中, 凝血酶原的激活是關(guān)鍵的一步。采用單獨的Ca2+激活, 即在粗凝血酶原溶液中加入一定濃度的 CaCl2溶液, 室溫下放置 1.5～2 h, 凝血酶活性達到最高, 殘留的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白后析出 , 過濾后即得活化的粗凝血酶溶液。
2.粗凝血酶的純化
純化的方法有很多種, 傳統(tǒng)的物理化學方法即丙酮沉淀法和硫酸銨分級鹽析法, 這兩種方法操作簡便, 成本低, 但得到的凝血酶制品純度不高, 回收率低, 應(yīng)用上受到一定限制。 與傳統(tǒng)的物理化學方法相比, 采用層析法分離血漿蛋白具有高特異性、高選擇性的優(yōu)點, 能夠用于血漿中一些微量物質(zhì)的分離, 以獲得高純度的適合臨床需要的血漿制品 , 并且與沉淀法相比更易于自動化;同時, 層析法純化過程中還能起到去除血漿制品中的病原體的作用, 從而提高血液制品臨床使用的安全性。目前純化凝血酶的層析法主要采用凝膠過濾層析、離子交換層析和肝素親和層析三種方法。
(1)凝膠過濾層析：凝膠過濾層析是應(yīng)用凝膠過濾介質(zhì)分離不同大小的物質(zhì)的一種技術(shù), 可用于相對分子質(zhì)量從幾百到10︿6數(shù)量級的物質(zhì)的分離純化。 該技術(shù)常用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分級分離和除鹽。 凝血酶的分子質(zhì)量為 36 ku, 選擇適的過濾介質(zhì)就能有效的去除其他雜蛋白。
(2)離子交換層析：離子交換層析是利用蛋白質(zhì)所帶離子或表面電荷的區(qū)別, 將目標蛋白吸附到 DEAE、CM等離子交換柱上而達到去除雜蛋白的目的的一種方法。 離子交換層析在治療用血漿蛋白制品的制備中得到廣泛的應(yīng)用。 在 pH﹥ 5.5的條件下, 凝血酶分子帶負電荷, 因此可用陰離子交換柱對其進行純化。
(3)肝素親和層析：親和層析是應(yīng)用耦聯(lián)親和配基的親和吸附介質(zhì)為固定相親和吸附目標產(chǎn)物, 使目標產(chǎn)物得到分離純化的液相層析法。 凝血酶與低分子質(zhì)量肝素之間有特異性的作用。 利用它們之間的特異性親和作用, 可以將低分子質(zhì)量肝素固定載體上, 對凝血酶進行親和層析純化。
藥物相互作用
1.本品遇酸、堿、重金屬發(fā)生反應(yīng)而降效。2.為提高上消化道出血的止血效果，宜先服一定量制酸劑中和胃酸后口服本品，或同時靜脈給予抑酸劑。
3.本品還可用磷酸鹽緩沖液(pH7.6)或冷牛奶溶解。如用阿拉伯膠、明膠、果糖膠、蜂蜜等配制成乳膠狀溶液，可提高凝血酶的止血效果，并可適當減少本品用量。
有關(guān)凝血酶的概述、理化性質(zhì)、藥理作用、臨床應(yīng)用、注意事項等是由Chemicalbook的丁紅編輯整理。（2015-11-16）
臨床應(yīng)用
1.對于發(fā)生急性消化道出血的患者可口服凝血酶使出血部位迅速止血。2.對難治性產(chǎn)后出血可采用液體噴灑或紗布按壓的方式給予凝血酶止血治療。
3.在泌尿外科中可通過導(dǎo)尿管灌注凝血酶溶液和抗生素來治療出血性膀胱炎, 可同時達到止血和促進受損上皮組織再生修復(fù)的作用。
4.在以往使醫(yī)生感到頭痛的耳鼻喉科疾病及相關(guān)手術(shù)出血的處理上, 采用直接灌注凝血酶或用凝血酶液浸濕的明膠海綿敷貼出血處, 可得到滿意的止血效果, 減輕病人痛苦。
5.不僅在腦出血、腦缺血中有毒性作用, 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常發(fā)育和損傷保護中也有重要作用。
用法用量
口服或灌注：用于消化道出血，將本品用溫開水或生理鹽水(不超過37℃)溶解成10～100U/ml的溶液，每次 1000～4000U，也可根據(jù)出血部位及程度適當增減濃度、次數(shù)。 局部用藥：①一般劑量為將本品用滅菌生理鹽水溶解成 50～200U/ml的溶液，噴霧創(chuàng)面。 ②大量出血時，可使用明胺海綿紗條或氧化纖維素蘸取本品溶液貼于創(chuàng)面或?qū)⒏煞蹏姙⒂趧?chuàng)面。③整形外科、拔牙、皮膚移植、肝素化患者穿刺部位滲血，常用本品100U/ml溶液止血。 ④肝脾破裂大出血止血采用凝血酶溶液1000～2000U/ml。
不良反應(yīng)
1.偶可致過敏反應(yīng)，應(yīng)立即停藥，并進行抗過敏治療。2.凝血酶誤入血管可致血管內(nèi)凝血（血栓形成）而危及生命。
3.外科止血中應(yīng)用凝血酶曾有致低熱反應(yīng)的報道。
注意事項
1.本品必須直接與創(chuàng)面接觸，才能起止血作用；應(yīng)新鮮配制使用。2.嚴禁作血管內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射，以防引起局部壞死甚至形成血栓而危及生命。
3.加溫，酸、堿或重金屬鹽類可使其活力下降而失去作用。
4.如出現(xiàn)過敏反應(yīng)癥狀時應(yīng)停藥。
5.妊娠期僅在具有明顯指征下，病情必要時才能使用。