156289-80-4
中文名稱
波形蛋白
CAS
156289-80-4
156289-80-4 結(jié)構(gòu)式
安全數(shù)據(jù)
常見問題列表
概述
Vimentin(波形蛋白,Vim)為極度保守的細(xì)胞骨架Ⅲ型中間絲蛋白,主要表達(dá)于中胚層起源的間充質(zhì)細(xì)胞中,以多聚體纖維穩(wěn)定存在。Vim單體僅溶于高離子序列溶液如尿素、陰離子表面活性劑、鹽酸胍溶液等,分子量為53kDa,等電點(diǎn)5.05,在pH值7.2-7.4最穩(wěn)定。Vim具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、遷移、信號(hào)傳導(dǎo)、凋亡以及自身抗原和細(xì)胞因子特性,在感染、腫瘤、自身免疫、固有免疫等方面顯現(xiàn)復(fù)雜的功能,具有生物藥品開發(fā)的廣闊前景。
純化方法
(1)粗提:解剖豬眼取晶狀體,浸入粗提液后勻漿制得混懸液;將混懸液離心后棄上清液,取沉淀物重懸數(shù)次并離心;取沉淀物凍干制得粗提粉;
(2)精提:以精提液溶解步驟(1)中的粗提粉,離心后去沉淀,取上清液濃縮后得到精提物溶液;
(3)分離:取精提物溶液加載到預(yù)平衡的DEAESepharoseFF柱(二乙胺基乙基鍵合快流速瓊脂糖凝膠弱陰離子交換柱),先使用第一緩沖液洗脫大部分的42kDa雜蛋白,再使用第二緩沖液進(jìn)行線性洗脫,收集餾分;
(4)純化:對(duì)各餾分用10%SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠)電泳,做Western-Blot(免疫印跡法)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行蛋白成分檢測(cè);合并53kDa目標(biāo)波形蛋白含量達(dá)80%以上的餾分,經(jīng)透析、凍干即得純化Vimentin粉。