127103-11-1
127103-11-1 結(jié)構(gòu)式
基本信息
戈雷拉肽,THYMOSINΒ4(1-4)
乙酰基-絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸
GORALATIDE
Acetyl-SDKP
SERASPENIDE
AC-SDKP-DELTA
Thymosin β4 (1-4)
Thymosin β4 (1-4)
AC-SER-ASP-LYS-PRO
AC-SER-ASP-LYS-PRO-OH
ACETYL-SER-ASP-LYS-PRO
物理化學(xué)性質(zhì)
常見問題列表
1.肽樹脂的合成
(1)制備Fmoc-Pro-樹脂：
稱取5克2-氯-三苯氯甲基樹脂，用二氯甲烷(DCM)100ml浸泡60分鐘，在上述的樹脂中，加入DIEA 4.5ml，3.38g Fmoc-Pro-OH，25℃反應(yīng)2小時(shí)，再加入封閉試劑甲醇1.5ml，25℃反應(yīng)2小時(shí)，樹脂用35ml異丙醇洗滌兩次、再用35ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)洗兩次，獲得Fmoc-Pro-樹脂；
(2)制備Fmoc-Lys(Boc)-OH樹脂：
在步驟(1)的Fmoc-Pro-樹脂中，加入35ml脫帽試劑，25℃反應(yīng)10分鐘，用真空泵抽干，重新加入35ml脫帽試劑25℃反應(yīng)30分鐘，抽干，用35ml異丙醇洗滌2 次，35mlDMF洗滌2次，重蒸餾的35mlDMF洗滌2次，取少量樹脂加4ml茚三酮試劑， 沸水中加熱3min，檢測(cè)結(jié)果呈陽性。加入用重蒸餾的DMF溶解的4.69gFmoc-Lys(Boc) -OH、2mlDIEA、3.22gTBTU、5mlHOBt的混合物，22℃反應(yīng)60分鐘，用真空泵抽干，用異丙醇洗滌2次，DMF洗滌2次，抽干，取少量樹脂加4ml茚三酮試劑，沸水中加熱3min，檢測(cè)結(jié)果呈陰性。獲得Fmoc-Lys(Boc)-Pro-樹脂；
所述的脫帽試劑的組分和體積比為：PIP∶DMF＝1∶2.5，下同；
(3)制備Fmoc-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂：
在步驟(2)的Fmoc-Lys(Boc)-Pro-樹脂中，加入脫帽試劑脫帽兩次，條件 同步驟(2)；加入用重蒸餾的DMF溶解的4.12g Fmoc-D-Asp(otBu)-OH、2mlDIEA、3.22gTBTU、5mlHOBt的混合物，22℃反應(yīng)60分鐘，用真空泵抽干，用異丙醇洗滌2 次，DMF洗滌2次，取少量樹脂加4ml茚三酮試劑，沸水中加熱3min，檢測(cè)結(jié)果呈陰 性，抽干，取少量樹脂加4ml茚三酮試劑，沸水中加熱3min，檢測(cè)結(jié)果呈陰性。獲 得Fmoc-D-Asp(otBu)--Lys(Boc)-Pro-樹脂；
其余操作以及工藝條件同上；
(4)制備Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂：
在步驟(3)的Fmoc-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂中，加入脫帽試劑脫帽兩次，條件同步驟(2)；加入用重蒸餾的DMF溶解的3.84g Fmoc-Ser(tBu)-OH、2mlDIEA、 3.22gTBTU、2mlHOBt的混合物，22℃反應(yīng)60分鐘，用真空泵抽干，用異丙醇洗滌2 次，DMF洗滌2次，抽干，取少量樹脂加4ml茚三酮試劑，沸水中加熱3min，檢測(cè) 結(jié)果呈陰性，獲得Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂；
(5)制備Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)--Lys(Boc)-Pro-樹脂(肽的乙?；?：
在步驟(4)的Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂中，加入脫帽試劑脫帽兩次，條件同步驟(2)；加入6ml乙酸酐、50mlDCM、3mlDIEA的混合物，22℃反應(yīng)60分鐘，用真空泵抽干，用異丙醇洗滌2次、DMF洗滌2次，甲醇洗3次，甲醇浸泡30-60分鐘，抽干，用氮?dú)獯蹈呻臉渲筛深w粒，所得到的肽樹脂為獲得Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂；
2.肽樹脂的切割分離
把吹干的Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-樹脂倒入玻璃的切割瓶中，加入預(yù)冷至-20℃的切肽試劑(TFA∶H2O＝95∶5，體積比)80ml，20℃反應(yīng)1.5小時(shí)，過濾除去樹脂，加-20℃的冰乙醚沉淀，離心收集沉淀物，用冷乙醚洗滌1次，低溫冷凍干燥16小時(shí)，獲得四肽異構(gòu)體粗品2.1g；
3.對(duì)四肽異構(gòu)體粗品的分離純化
(1)樣品準(zhǔn)備：將四肽異構(gòu)體粗品溶于水溶液中，過濾，備用。
(2)四肽異構(gòu)體粗品HPLC分析：取濾液20μl用HPLC分析，色譜條件：C18色譜柱 (Hypersil-ODS2，Φ5um 4.6×250mm)，流動(dòng)相：A：0.1％三氟乙酸加99.9％水；B： 0.1％三氟乙酸加99.9％乙腈；梯度洗脫；流速為1ml/min；檢測(cè)波長為：215nm；
(3)四肽異構(gòu)體粗品HPLC純化：
取濾液3ml用HPLC純化，選用C18色譜柱(Hypersil-ODS2，Φ5um 10×250mm)， 流動(dòng)相：A：0.1％三氟乙酸加99.9％水；B：0.1％三氟乙酸加99.9％乙腈；梯度洗脫； 流速為10ml/min；檢測(cè)波長為：215nm；收集目標(biāo)峰液，樣品峰合并后去鹽，凍干， 獲得四肽異構(gòu)體純品1.56g。
(4)四肽異構(gòu)體純品分析：
取少量樣品，配成0.5mg/ml，過濾，取20μl用HPLC分析，條件同四肽異構(gòu)體 粗品HPLC分析條件。
本實(shí)施例中，戈雷拉肽粗品的純度為91.8670％，收率為 74.3％，純度為98％(HPLC歸一化法)。
N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro is degraded specifically by ACE, and its plasma level rises substantially during ACE inhibitor therapy. Flow cytometry of rat cardiac fibroblasts treated with N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro shows significant inhibition of the progression of cells from G0/G1 phase to S phase of the cell cycle. Moreover, phosphorylation and nuclear translocation of Smad2 is decreased in cardiac fibroblasts treated with N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro. N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline appears to exert this function by blocking the action of a stem cell-specific proliferation stimulator and acts selectively on quiescent progenitors. N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro inhibits collagenase expression and activation is associated with increased expression of TIMP-1 and TIMP-2. N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro normalizes the IL-1β-mediated increase in MMP-2 and MMP-9 activities and MMP-13 expression.
N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro prevents hypertension-induced inflammatory cell infiltration, collagen deposition, nephrin downregulation and albuminuria, which could lead to renoprotection in hypertensive mice.